大鼠脑组织取材和保存方法

宝宝妈妈2023-02-18  79

在神经生物学研究中,进行脑组织形态学观察如电镜、组织化学、原位杂交等实验时,为防止自溶,使组织与细胞保持其生活时或死亡时的形态结构,并保存其中要检测的化学物质,通常要对脑进行固定处理。最常用的方法是经心灌注固定。

本实验的目的是学习大鼠脑固定和取材的基本方法,为今后进行相关实验打好基础。

【实验步骤与观察项目】

一、实验步骤

1.Wistar大鼠250~300g左右,10%水合氯醛按4ml/kg 经腹腔注射麻醉。仰卧位固定于手术台上。

2.开胸 用左手持镊子夹起腹部皮肤,右手持剪刀在剑突下剪一小口,止血钳夹持剑突上提,在剑突两侧2cm处向上剪断肋骨至下颌,上翻胸廓,暴露心脏。

3.心脏左心室穿针 自心尖处插入灌注针至升主动脉,并用止血钳夹住。剪开右心耳。止血钳夹闭腹主动脉。

4.生理盐水冲洗 用针管抽取生理盐水通过灌注针注入心脏,直到大鼠两前肢及两肺变白为止(约100ml)。

5.4%多聚甲醛固定 将灌注针与置于高处的多聚甲醛输液瓶相接,通过重力作用继续灌注。刚开始灌注时大鼠前肢剧烈抽动(下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全),待前肢及颈部僵硬时,说明固定效果良好,灌注的脑组织白而硬。

6.取脑 沿颅后与颈椎之间断头,沿颅顶正中切开头皮去除软组织,用止血钳自枕骨大孔处渐次去除颅顶骨,充分暴露脑,剪断脑神经,取出完整脑。

7.解剖观察或切片 进行大体观察,可解剖海马、纹状体等结构。或者将取出的脑置于30%蔗糖缓冲液,4℃冰箱内保存,将来作冷冻切片。

二、观察项目

观察灌流后的脑组织是否完整,血管内是否还残留血液,颜色是否洁白并且具有一定的硬度。

A、分析题干信息可知,小鼠刚进食,不用再给小鼠喂食,A错误;

B、该实验的目的是验证胰岛素能降血糖,实验的自变量是否注射了胰岛素,由提供给出的实验思路可知,该实验缺乏对照实验,应该设置注射等量酸性生理盐水的对照组,且注射的部位、方法同实验组,B正确;

C、胰岛素口服后在消化道中消化形成氨基酸,失去胰岛素的功能,C错误;

D、对惊厥现象是否是由血糖浓度过低引起的需要进一步进行验证,验证的方法是出现惊厥现象后,还应对其中的一半注射葡萄糖溶液抢救,另一半不予抢救作为对照,如果注射葡萄糖溶液抢救的小鼠恢复正常状态,没有抢救的小鼠不恢复,则说明惊厥确实是由于葡萄糖浓度过低引起的,D正确.

故选:BD.

对照试验。生理盐水是与老鼠的细胞里面的细胞液浓度类似,不会导致细胞失水,是让老鼠正常活动,并且会有另外一个老鼠灌一些药剂,从此观察两个老鼠的反应,所以是对照试验,是一个非常重要的试验试剂。


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